細胞破碎是指利用外力破壞細胞膜和細胞壁,釋放細胞,包括目標產物成分。它是非分泌生化物質(產品)分離和純化細胞內合成的基礎。結合重組DNA在技術和組織培養技術方面取得了重大進展,蛋白質現在可以大規模生產。但由于細菌、酵母、真菌、植物細胞壁的成分不同,同類細胞形成的網狀結構也不同,細胞壁的強度也不同。雖然動物細胞沒有細胞壁,但它們有細胞膜,也需要一定的超聲波細胞粉碎機來破碎樣品,以達到提取產品的目的。
一、細胞破碎方法
1.機械法
1.1組織搗碎
將材料制成稀釋液,放置在氣缸中約1/3的體積,蓋住氣缸蓋,先將調速器撥到最慢的地方,開關后逐漸加速到所需的速度。一般用于動物組織、植物肉質種子、嫩葉芽等,轉速可達1萬rpm/M以上。由于旋轉刀片的機械切割力很大,很少使用核酸等大分子。
1.2勻漿器
先將切碎的組織放入管內,然后套入研磨桿來回研磨,上下移動,即可將細胞研碎。均漿器的磨球與玻璃管內壁之間的間隙保持在幾毫米的距離。制作勻漿器的材料,除玻璃外,還可以用硬質塑料、不銹鋼、人造熒光樹脂等。細胞破碎程度高于高速組織破碎機,適用于少量動物器官組織。
存在的問題:團體或絲狀真菌容易造成堵塞。較小的革蘭氏陽性頭和一些亞細胞器質地堅硬,容易損壞均勻的,不適合使用此方法。
1.3研缽
主要用于細菌或其它硬質植物材料,研磨時經常加入少量石英砂、玻璃粉或其它研磨劑,以提高研磨效果。
1.4細菌磨
它是一種改良的研磨機,研磨面積比研碗大,出口低。在操作過程中,先將細菌和磨粉混合成糊狀,每次加入一個小勺子,磨20-30秒即可完全磨碎細菌細胞。
2.化學及生物化學法
2.1自溶法
在一定pH并在適當的溫度下,利用組織細胞內的酶系統破碎細胞。甲苯、氯仿等少量防腐劑常用于防止細胞污染。
2.2酶溶法
細胞壁被各種水解酶分解,如溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶、半纖維素酶、脂肪酶等。有些細菌對溶菌酶不敏感,加入少量的硫基試劑或8摩爾尿素進行溶解。
2.3化學滲透法
一些有機溶劑(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性劑、金屬螯合劑、變性劑和其他化學物質可以改變細胞壁或膜的滲透性,從而有選擇地滲透內合物。化學滲透取決于化學試劑的類型、細胞壁和膜的結構和組成。
3.物理法
3.1反復凍溶法
原理:細胞內冰晶的形成和細胞內外溶劑濃度的突然變化。方法:將破碎的細胞在-20度以下冷凍,在室溫下融化,重復幾次,導致細胞結構因細胞內冰粒形成和殘留細胞液鹽濃度升高而膨脹。
3.2急熱驟冷法
將材料投入沸水中,維持85-90分鐘,至水浴中急速冷卻,此法可用于細菌及病毒材料。
二、超聲波細胞粉碎機原理
超聲波是物質介質中的彈性機械波,是一種波動形式,可用于檢測人體的生理和病理信息,診斷超聲波。同時,它也是一種能量形式。當一定劑量的超聲波在生物體內傳播時,通過它們之間的相互作用,可以改變生物體的功能和結構,即超聲波生物效應。
超聲對細胞的作用主要有熱效應,空化效應和機械效應。當超聲波在介質中傳播時,摩擦阻礙了超聲波引起的分子振動,將部分能量轉化為局部高熱(42-43℃),正常組織的臨界致死溫度為45.7℃,腫瘤組織比正常組織更敏感,因此腫瘤細胞在這種溫度下代謝紊亂,DNA,RNA,影響蛋白質合成,殺死癌細胞,不影響正常組織。空化作用是在超聲波照射下在生物體內形成空氣泡沫。隨著空氣泡的振動及其劇烈的聚集和爆炸,產生機械剪切壓力和動蕩,導致腫瘤出血和組織分解,導致壞死。此外,空化泡破裂時會產生瞬時高溫(約5萬℃),高壓(可達500×104Pa),水蒸氣熱解離可能會產生.OH自由基和.H原子,由.OH自由基和.H氧化還原反應可導致多聚物降解、酶失活、脂質過氧化和細胞殺傷。機械效應是超聲的原發效應,超聲波在傳播過程中介質質點交替地壓縮與伸張構成了壓力變化,引起細胞結構損傷。殺傷作用的強弱與超聲的頻率和強度密切相關。
三、超聲波應用
1、超聲波提取生物納米(超聲波化學合成法)
在超聲化學反應中,聲波的空化效應起著關鍵作用。在超聲輻射過程中,空化氣泡會在液體中形成、生長和崩潰。當空化氣泡崩潰時,會產生強壓脈沖,產生許多獨特的性質,如5萬K高溫,超過200Mpa壓力,這是超聲化學合成的能量來源,可以在一些特殊的粉末表面合成納米粒子。
2、超聲波制藥
2.1注射用醫藥物質的分散
將磷脂類與膽固醇混合用適當方法與藥物混合在水液中,經超聲分散,可以得到更小粒子供靜脈注射。
2.2草藥提取
利用超聲分散破壞植物組織,加速溶劑滲透組織,提高中草藥有效成分的提取率。例如,金雞納樹皮中的所有生物堿通常需要5個多小時才能入侵,超聲分散只需要半個小時。
2.3制備混懸劑
在超聲空化和強攪拌下,在含有表面活性劑的水溶液中分散固體藥物可形成1um混懸劑左右口服或靜脈注射。例“靜注喜樹堿混懸劑”“肝臟造影劑”、“硫酸鋇混懸劑”。
2.4制備疫苗
將細胞或病菌借助于超聲分散將其殺死以后,再用適當方法制成疫苗。
3、超聲波對化妝品的分散
為了進一步提取藥物精華和顆粒細化,節約生產成本,達到分散乳化的效果,使化妝品深入皮膚,使皮膚吸收良好,發揮藥物的效果和作用,超聲乳化可以達到非常理想的效果。如果使用超聲分散,蠟和石蠟乳化、乳液等油的顆粒可以在不使用乳化劑的情況下分散。石臘在水中分散的粒子直徑可達1um以下。
4、超聲波對酒的醇化—催陳技術
一瓶葡萄酒以其醇厚的口感、柔軟的口感和濃郁的香氣而備受青睞。人們經常用陳酒來形容珍貴的葡萄酒。一瓶上世紀的陳酒價格是幾萬元。它的價格意味著時間的儲存。葡萄酒的主要控制因素是化學變化,即酸的形成,酯參與乙醇和水的結合。剛出廠的酒含有保持醇厚和辛辣的味道,需要很長時間才能解決。這種緩慢的變化被稱為酒精的醇化。用功率1.6KW,頻率17.5-22KHZ的超聲波處理5-10min,可使酒的老熟時間縮短1/3到1/2。
四、超聲波粉碎技術的優缺點
目前,超聲波儀器主要包括超聲波振蕩器和超聲波粉碎機。其優點是保持細胞活性,省時,樣品損失少,可以處理大量樣品。因此,超聲細胞粉碎機的不斷發展和改進,對大規模生產的貢獻是非常可觀的。也是目前生物生產中最常用的破碎方法。不同菌種的發酵液。超聲破碎效果差異較大。一般來說,桿菌比球菌更容易破碎。
相關搜索: