鹿茸多肽是一種小分子、分子量在1,000~50,000之間,活性強、便于吸收、副作用小的蛋白。經研究,鹿茸多肽具有抗炎、抗氧化、增強免疫并能促進細胞分化、傷口愈合、抑制腫瘤細胞、促進神經系統、周圍神經系統的再生等藥理作用,因此對鹿茸多肽的研究具有越來越重要的意義。而如何高效提取破碎鹿茸多肽是進行鹿茸多肽研究的必要前提,于是凈信超聲波細胞破碎儀便成功參與破碎工作。
據我國《本草綱目》中記載:鹿茸具有補腎壯陽、強筋健骨、生精益血等功效。鹿茸是一種特殊的軟骨組織,含有多種活性因子?,F代醫學表明,鹿茸的化學成分較為復雜、其中含有大量的氨基酸、多肽、蛋白質、無機元素等成分,而蛋白質成分高達55.26%,更加證明鹿茸多肽是其主要的生物活性成分物質。
二、鹿茸多肽常見的提取方法
1、 有機溶劑萃取法
利用提取物在兩種互不相容的試劑中分配系數不同,使用有機溶劑萃取劑來提取鹿茸中的蛋白質及多肽有效成分。
2、 裂解液法
通過裂解液使細胞組織快速破裂的方法。
3、 酶解法
酶解法是利用活性酶來水解特定的某種物質。在實驗中,通過對酶的種類和反應的時間與溫度以及氫離子濃度指數等等多方面控制,從而進行有效的提取。
4、 勻漿法
將含一定量水的樣品與提取溶劑在勻漿提取裝置中混合勻漿,通過機械及液力剪切作用將物料撕裂和粉碎,使物料破碎和有效成分的提取同步進行,實現有效成分快速、強化提取的目的。
5、 超聲波萃取法
超聲波萃取是使用超聲波萃取機,利用超聲波輻射壓強產生的強烈空化應效應、機械振動、擾動效應、高的加速度、乳化、擴散、擊碎和攪拌作用等多級效應,增大物質分子運動頻率和速度,增加溶劑穿透力,從而加速目標成分進入溶劑,促進提取進行的成熟萃取技術。
三、常見的五種提取方法優劣勢比較
1、有機溶劑萃取法:
優勢:有機溶劑分布廣泛;價格低且利于回收;鹿茸多肽能溶解于有機溶劑之中。
劣勢:有機溶劑易引起蛋白質的變性和失活;要求在低溫環境下進行,控制有難度;成本較高;;提取率較低。
2、裂解液法
優勢:成本低,時間短,提取率較高。
劣勢:溶劑有毒,引起蛋白降解,會失去活性;后續除雜過程復雜,步驟繁瑣,不利于后續研究。
3、酶解法
優勢:提取率較高;提取物純度更高,活性更好。
劣勢:酶作用中需要控制的條件較多,如酶的種類選取、反應溫度、時間、加酶量、PH等。
4、勻漿法
優勢:提取率較高,成本低。
劣勢:耗時長。
5、超聲波萃取法
優勢:提取率和質量均較高,操作簡易,耗時短,安全性高,成本低。
劣勢:對超聲波敏感的提取物需慎用,空化作用會產生活性氧,需要
安全性高; 加一些巰基保護劑。
四、勻漿法和超聲波萃取法對比研究
1、 勻漿法和超聲波萃取法步驟
勻漿法
1、稱取新鮮的梅花鹿茸約100g,剁成小塊,粉碎機粉碎后放入燒杯中,用預先放于層析柜(4℃)中冷卻過的蒸餾水沖洗數次,直至完全無血色;
2、加入預冷的勻漿液(pH值3.5的冰醋酸溶液)1 000 ml
3、膠體磨勻漿6 h
4、不同時間間隔吸取混合勻漿液5 mL,于4℃,以10 000 r/min 的轉速離心15 min后吸取上清液,標號后,保存于4 ℃中待測
超聲波萃取法(1/2/4與勻漿法相同):冰浴條件下超聲破碎(工作5s ,停止 3 s)
2、 結果
依照統計學方法對以上勻漿法和超聲波萃取法實驗步驟每組數據均測定 3 次,并計算平均值,求 3 個數據的 SD(相對標準偏差)。
實驗結果非常明顯,采用超聲波萃取法處理的鹿茸在20mins時,濃度就達到了1.25mg/mL,而在40mins到80mins過程中,濃度增大不明顯,幾乎已達到最高值。
而采用勻漿法測蛋白濃度結果(如圖表),鹿茸蛋白的濃度隨著勻漿時間的延長升高得比較緩慢,當勻漿 6 h 后,鹿茸蛋白的濃度僅為 0.42 mg/mL。
五、超聲波細胞破碎儀萃取法提取鹿茸多肽總結
上述實驗表明,采用超聲波萃取的方法提取鹿茸多肽更具優勢:
?。?)節約時間,效率高。一小時內提取效率是勻漿法的10倍不止,且超聲萃取時長在40分鐘時相對獲得率最高;
?。?)提取獲得率高。相對于勻漿法而言,超聲穩定期提取獲得率大約是勻漿法的4倍左右。
六、細胞粉碎儀產品介紹
超聲波細胞粉碎機由超聲波發生器和換能器二大部分組成。主要工作原理是利用超聲波在液體中的分散效應,使液體產生空化的作用,從而使液體中的固體顆?;蚣毎M織破碎。
特點優勢:采用PWM控制電源,工作時間、功率連續可調,適用范圍更廣;采用7寸TFT高分辨率觸摸屏顯示;采用精度更高更智能的中央微機集中控制;樣品溫度自動檢測顯示功能、功率顯示微機跟蹤、故障自動報警;隔音裝置采用鈑金、噴塑、ABS材質,模具化設計,帶門鎖功能;應用范圍也很廣泛,支持土壤巖石樣品的均質、分散和提??;細胞、病毒、孢子的裂解和破碎;納米材料的分散、裂解等。
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